Becoming With Schizophyllum Commune: Skapa en steril kultur från hittade svampar: 3 steg (med bilder)

2024 Författare: John Day | [email protected]. Senast ändrad: 2024-01-30 12:46

Denna instruerbara är inriktad på att förklara hur man skapar en steril kultur av svampen Schizophyllum Commune (vanligt namn Split Gill -svamp) på en petriskål med hittade svampar. Schizophyllum Commune har visat sig ha över 28 000 kön, kan hittas på alla kontinenter utom Antarktis och har förmågan (liksom andra "vita och bruna rötsvampar") att bryta ned hormonstörande föroreningar (plast, hormonliknande industriella petrokemikalier som gödningsmedlet Atrazine, mjukgöraren Bisphenol-A eller det syntetiska hormonet Diethylstilbestrol).

Jag kommer att gå igenom tekniker för identifiering av vilda svampar, hur man gör en petriskål med agar näringsämnen och hur du använder dina hittade svampar för att odla en steril isolerad kultur i din petriskål. Andra instruktioner i denna serie går över tekniker som genetisk identifiering av svampar, enkla enzymatiska analyser för att testa svampens förmåga att bryta ner plast och hormonliknande föroreningar och hur man gör ost med S. Commune.

Detta projekt kom från Mary Maggics, Paula Pins och mig själv under ett residens på HANGAR i Barcelona Spanien hösten september 2018. För mer information om projektet läs vidare ~ ~ eller hoppa över hela Bla Bla och gå direkt till Step 1 för handledningen:)

Bilderna är från Schizophyllum Commune Fanzine ~ filer kan laddas ner gratis här

Under residenstiden var våra tre huvudmål att:

1 ~ Forskning och smält den vetenskapliga litteraturen om Schizophyllum Commune och dess olika interaktioner med hormoner och hormonstörande petrokemiska föroreningar. S. Commune är en av många "vita och bruna röta" svampar med förmågan att bryta ner hormonella och hormonstörande föroreningar. Dessa svampar matas av träd genom att utsöndra "lignocellulosiska" enzymer från sina nätverkskroppar eller "mycelia" och enzymerna kan bryta ner cellulosa och lignin som träd är gjorda av. På grund av strukturella likheter mellan cellulosa, lignin och EDS / hormoner som Atrazine, BPA, Estradiol, Diethylstilbestrol och Nonylphenols kan de "lignocellulosiska" enzymerna som utsöndras av svamparna också bryta ner en mängd olika toxiska ämnen. Utöver detta producerar S. Commune immunstimulerande polysackarider som är användbara som cancerförebyggande medel och behandlingar (Godkänd i Japan för behandling av livmoderhalscancer), kan förbättra fytoöstrogena egenskaper hos vissa växter genom jäsning, kan användas istället för löpe och laktobacilius i osttillverkningsprocesser och producerar trombinpropplösande enzymer (användbara vid behandling av trombos). Konstigt nog används samma "beta-glukaner" som kan extraheras med kokande vatten som cancerbehandlingar och immunstimulerande medel, även av petroleumindustrin för att öka oljeavkastningen, vilket binder S. Commune i en bizar-återkopplingsslinga till produktionen av hormonstörande petrokemikalier kan den brytas ned och åtgärdas.

2 ~ Utveckla DIY och DIWO (gör det med andra) protokoll som förenklar dessa mottagningar för att arbeta med EDC och svampar för att översätta kodifierad vetenskaplig kunskap till ett språk som är mer tillgängligt. Använd dessa mottagningar för utbildning, för att ifrågasätta, för motståndskraft mot molekylära koloniseringar och för att skapa nya berättelser om mångfald av arter och vår kollektiva mutagenes.

3 ~ Utmana den dominerande cisheteronormativa, queerfobiska diskursen kring hormonstörande kemikalier (EDC). För att citera Malin Ah-King och Eva Haywards stipendium om frågorna, "Många nyhetsbyråer rapporterar dessa skrämmande endokrina berättelser från våra bakgårdar. I ett försök att förgräna dessa frågor-som vi kommer att beskriva i följande medier har tänt en Frankenstein-metamorfos som hotar sex och sexualitet. I stället för att ta itu med de många andra hälsorisker som är förknippade med toxisk exponering står de mest sensationella och polemiska frågorna för debatt och kritisk respons. Det väcker frågor: Varför är sex mer centralt än cancer, autoimmun sjukdom, och till och med döden. Vilka kulturella nerver (varav många är globaliserade) utlöses? Och för oss med feministiska bekymmer, hur riktar vi om debatten bort från essentialism, sexism och heteronormativitet? " (Giftiga kön).

Schizophyllum Commune är en unik "vitrötsvamp" genom att den har visat sig ha över 28 000 genetiska kön. Denna anpassning, många teoretiserar, har möjliggjort den otroliga genetiska mångfalden hos denna art som finns på alla kontinenter runt om i världen utom Antarktis. Vi ville fira den vackra sexuella mångfalden hos denna organism som ett exempel på biologiens kärahet. Den dominerande diskursen kring EDC i media, och även från miljöaktivister fokuserar starkt på ovetenskapliga berättelser, att dessa molekyler orsakar vissa sexualiteter eller kön som vårt samhälle patologiserar, märker icke-normativa och ofta försöker eliminera eller undvika. Inte bara är det sex-panikartade, queer-fobiska fokuset för offentliga uppror om EDC: s vetenskapligt orealistiska (hormoner och hormonstörande ämnen gör inte människor queer eller trans) utan det ignorerar alla de förödande verkliga effekter som vi kan länka till EDC: fetma, sköldkörtelstörningar, vissa cancerformer, bland andra hälsorisker.

Steg 1: Hitta Schizophyllum Commune som bor i din gemenskap

Sterila kulturer i laboratorium av Schizophyllum Commune kan köpas för cirka $ 350 från en mikrobiologisk kulturbank som ATCC … vilket är anledningen till att vi valde att odla från vilda svampar gratis:)

Jag hade det lätt eftersom jag hade läst om Schizophyllum Commune och råkade märka att det växte på ett träd framför min lägenhet en dag. Om du inte är så lycklig att råka stöta på S. Commune i ditt grannskap, vill du gå till ett skogsområde för att söka efter "konsol" svampar som växer på sjukt lövträd (träd som ser ut som de inte gör för väl) eller fallna träd. S. Commune är en av de vanligaste befintliga svamparna runt om i världen och kan hittas i princip var som helst där det finns lövträ att växa på.

Mushroomobserver.org ger en stor detaljerad beskrivning av var och när du sannolikt hittar S. Commune, samt hur du identifierar det och hur du undviker "look alikes" som kan leda till felidentifiering:

"IDENTIFIKATION: Schizophyllum commune är lätt att identifiera genom sina kluvna gälar, tätt hår och fläktformad keps. Locket är 1-4,5 cm brett och vanligtvis ett skal eller en fläktform med en grå till vitaktig yta. Basidiosporer är 5-7,5 × 2 -3 mikrometer En liknande svamp som kallas "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa är inte lika utbredd.

HABITAT: Schizophyllum commune växer på lövträ med hjälp av enzymer för att bryta ned lignin och orsakar "vit ruttna". Så det finns i de flesta träiga områden. Det kan hittas året runt på grund av dess förmåga att torka ut, rehydrera under bättre förhållanden och sedan fortsätta att sporulera.

Denna svamp kan vara parasitisk på träd med liten diameter som är stressade av andra faktorer, till exempel torka.

LIKA LIKA: Plicaturopsis crispa eller "Crimped Gill" liknar Split Gill. Den har också en skal-/fläktformad fruktkropp. Kepsen är dock rödbrun eller gulbrun, och undersidan är mycket distinkt. Den har krympt ven som gälar som är mycket annorlunda än de kluvna gälarna i Schizophyllum commune. Crimped Gill är mindre vanligt men distinkt när det hittas."

Steg 2: Gör näringsplattor för S. Commune att växa på

För att isolera en kultur av S. Commune du hittat behöver du några petriskålar fyllda med mat för svampen. Malt extrakt Agar är en enkel att göra mat för S. Commune, eller "näringsmedier" som kan göras med lättillgängliga ingredienser. Det är också en bra matkälla att använda när man gör enzymatiska analysförsök med S. Commune och andra vita eller brunröta svampar ~ ~ denna process kommer att omfattas av en annan instruerbar.

SIDANMÄRKNING: Om du hade problem med att hitta S. Commune finns det många andra svampar i samma familj som kan odlas med samma processer och är lika bra om inte bättre på att bryta ned hormonstörande föroreningar. Turkey Tail (Trametes Versicolor) har hittats i många studier som tittat på hundratals vita och bruna rotsvampar som de högsta producenterna av "lignocellulosiska" enzymer som bryter ned petrokemisk förorening. Ostron svamp är också mycket bra på detta.

Jag utför mitt mikrobiologiska arbete i ett samhällsbiologiskt laboratorium vid namn BUGSS (Baltimore Underground Science Space) där jag har tillgång till glas, digitala vågar, graderade cylindrar, en autoklav (för värme- och trycksterilisering av media), etc. Labs som denna har uppstod runt om i världen under det senaste decenniet, så du kanske vill kolla den här listan för att se om det finns någon nära dig. Om du inte har ett bra communitylaboratorium som detta i ditt område måste du investera i grundläggande utrustning för denna process, till exempel:

1 ~ En digital skala för att mäta dina ingredienser exakt

2 ~ En tryckkokare för att sterilisera media med värme och ånga

3 ~ Petriskålar, kan köpas på nätet ganska billigt, återanvändbart glas eller engångsplast kommer att fungera men återanvändbar är alltid bättre:)

4 ~ Vissa glasvaror för att blanda dina ingredienser i, sterilisera i och lagra i.

Om du inte vill investera i den utrustningen kan du hitta förgjutna malt extrakt agarplattor att köpa på webbplatser som Amazon ~ det blir bara dyrare i längden om du planerar att fortsätta med mikrobiologiskt arbete.

Det finns redan många bra guider och youtube -videor om hur man gör egna petriskålar med näringsämnen hemma. Så snarare än att gå in i detalj på det här, kommer jag bara att länka till ett par - och ge receptet för 2% Malt Extract Agar, som är näringsmediet du kommer att använda.

Freshcap Musrooms: Guide om hur man gör agarplattor för att odla svampar hemma

Mykoweb: Komma igång med svampodling

Malt Extract Agar Tekniskt datablad

2% Malt Extract Agar (MEA) ~~ Recept för 1 liter:

20 g malt extrakt (vanligt utbud av öl, kan köpas online)

15 g Agar (stelnande medel - det här används ofta för att laga mat så att det kan köpas online eller i vissa livsmedelsbutiker)

1 liter H20 (jag brukar använda omvänd osmosvatten som kan köpas i de flesta livsmedelsbutiker i gallonkannor)

Detta recept kan enkelt ändras om du vill göra mindre mängder. Jag gör till exempel ofta bara 250 ml åt gången, så jag använder bara 5 gram malt extrakt, 3,75 gram agar och 250 ml vatten.

Steg 3: Inokulera din petriskål med svampar

Svampen du ser kallas "fruktkroppen", den är bara en liten del av organismen. Majoriteten av dess kropp är gömd i trädet (eller i marken) och förbrukar träet. Denna del av svampen kallas mycel. För att odla Schizophyllum Communes vita trådtråd, tentakulära, rhizomatiska, myceliska kropp på en petriskål, tar du ett prov av stammen, steriliserar och lägger på dina MEA -tallrikar. Mycel kommer att växa från det steriliserade svampstamkärnprovet och kolonisera petriskålen som ser ut som en vit bomullsmatta.

Du kommer att behöva:

• Malt Extract Agar (MEA) -plattorna du förberedde i föregående steg
• 70% isopropylalkohol (sprit) och en sprayflaska
• Pappershandukar
• Skalpell, eller bara en rakknivskärare i rostfritt stål kommer att fungera
• metallpincett
• handskar
• En låga - jag använder en alkolampa för sterilisering av instrument, NonDisjunction har en bra handledning om hur man gör en här.
• Steril yta att skära på (jag använde precis en steril petriskål för detta)
• Parafilm, en paraffinfilm som används för att täta petriskålar - du kan också bara använda maskeringstejp om du inte har detta

STERIL TEKNIK:

Det viktigaste du vill komma ihåg när du försöker använda steril teknik är att bakterier och sporer kontinuerligt faller i luften, så du vill hålla dina petriskålar täckta så mycket som möjligt. När du lyfter locken för att hälla media eller ympas, är det alltid bäst att hålla locket precis ovanför skålen, så att du kan komma åt insidan horisontellt, men hålla locket ovanför skålen för att förhindra att bakterier faller i. För det andra kan du är ett gigantiskt konglomerat av människor, bakterier, svampar och andra organismer ~~ även om du inte kan se det, omger du dig av ett tätt moln av mikrober som sprider sig från din kropp. I stället för att bara sitta på ytan av din hud sträcker sig ditt mikrobiom ut i luften ~~ sååååå, vifta aldrig med händerna över petriskålen eller luta dig över det öppna fatet för att titta i. Och använd handskar om du har dem;)

STÄLL IN DITT SEMI-STERILA ARBETSRUM

Välj en icke-porös arbetsyta fri från skräp och skräp. Spraya området med din 70% isopropylalkohollösning och torka av det med en pappershandduk. Placera din låga i mitten av ditt arbetsområde och tänd den. Du vill arbeta så nära lågan som möjligt eftersom det skapar ett litet sterilt fält runt det. Placera dina MEA -tallrikar på ena sidan och ditt svampprov på en steril skäryta på andra sidan. Jag använder normalt en steril petriskål som min sterila skäryta samt verktygsstöd. Häll lite isopropylalkohol i ett litet glas - du kommer att använda detta för att sterilisera ditt blad och pincett medan du arbetar.

*¡~ INOKULERA ~!*

Innan du gör någonting, sterilisera ditt blad och pincett genom att doppa dem i isopropylalkan och sedan hålla dem över lågan en stund. Efter sterilisering, vila dem på din sterila skäryta om du lägger ner dem. Använd pincetten, håll svampstammen stilla och skär en bit av änden av den. Ta denna bit och skär alla sidor så att du får en liten kub av svampstamkärna med alla yttre ytor borttagna. Detta hjälper till att bli av med alla andra mikrober som lever på svampen så att de inte förorenar din kultur. Doppa sedan stammkärnan i isopropylen i cirka 30 sekunder, dra ut och låt torka i det sterila fältet av lågan (använd inte lågan för att torka den, detta kommer att döda svampen). Låga sterilisera din pincett igen medan du väntar på att stamkärnan torkar. Lyft sedan helt enkelt locket på en av dina MEA -plattor för att skjuta in pincetten från sidan och använd den steriliserade pincetten för att placera spindelkärnan i mitten av plattan. Täta plattan med parafilm, och under de närmaste veckorna bör du se S. Commune mycelium kolonisera plattan.

Jag brukar göra flera tallrikar när jag arbetar med vilda prover så att om jag får förorening är det mer troligt att jag har minst en ren kultur.